Bromelaini ensüümi pulber

● Kasutame parimat toorainet.

želatiin SeedimineSigestion Üksus Analüütiline Meetod (GDU)

A. Eesmärk:

Seda protseduuri kasutatakse proteolüütilise aktiivsuse määramiseksBromelaini ensüümi pulber.

B. Varustus:

1. pH-meeter

2. Konstantse temperatuuriga veevann 45,0 kraadi ± 0,1 kraadi

3. Analüütiline tasakaal

4. Mõõtekolvid

5. Mahulised pipetid

6. Taimer

7. Digitaalne bürett (täpsus 0,1 ml)

8. Tõmbekubu

9. Automaatsed pipetid

C. Ohutus Ettevaatusabinõud: See test peab olla sooritatud sisse a suitsu kapuuts.

1. Kasutage standardseid laboriohutuse tavasid.

2. Formaldehüüd: valmistage ette ja hoidke kogu aeg tõmbekapis. Tuntud kantserogeen ja teratogeen.

3. Peroksiid: tugev oksüdeerija

D. Reaktiivid ja Reaktiiv ettevalmistused:

1. Destilleeritud vesi: ligikaudu 500 ml: reguleerige pH väärtuseni 4,5 0,1 N HCl-ga.

2. želatiin substraat:

a. Lahustage 25 grammi želatiini (Mikrobiologie. 1.04070) 375 ml kuumas vees ja laske keema tõusta. Jahuta 45 kraadini.

b. Reguleerige pH 4,5-ni 0,1 N HCl-ga ja lahjendage destilleeritud veega 500 ml-ni pH väärtusega 4,5.

c. Hoia želatiinist substraati 45 kraadi juures.

3. Puhver Lahendus:

a. Lisage aeglaselt 15 g NaCl 40–50 ml veele 150 ml keeduklaasis ja segage lahustumiseni.

b. Lisage 0,570 ml äädikhapet.

c. Reguleerige pH 4,5-ni 0,2 N HCl-ga (maht on suurem kui 100 ml).

4. 3 % Vesinik peroksiid:

a. Pipeteerige 2,5 ml 30% vesinikperoksiidi (põhilahus) 25 ml mahumõõturisse

kolbi ja lahjendada destilleeritud veega pH väärtusega 4,5 mahuni

5. 37 % Formaldehüüd pH 9.0:

a. Reguleerige piisav kogus (100 ml) formaldehüüdi pH 9,0-ni 0,1 N NaOH-ga (umbes 20 ml)bromelaiini ensüümi pulberformaldehüüdi proovi kohta enne pH reguleerimist.)

6. 0.100 N NaOH: (Ostetud standardiseeritud)

a. Põhilahus: standardiseeritud 0,100 N juures

E. Menetlus:

1. Ensüümi valmistamine:

a. Ensüümi preparaadi arvutamine

Kaal=100/sihtaktiivsus (umbes 0,05 g või 50 mg)

A. Kaaluge ensüüm täpselt 50 ml mõõtekolbi

B. Lisage 8,3 ml puhverlahust.

b. Lase 30 minutit toatemperatuuril seista.

c. Lahjendage destilleeritud veega pH 4,5 50 ml-ni, lisage väike segamisvarras ja segage

lisaks 10 kuni 15 minutit

2. Ensüümiprotseduur:

a. Pipeteerige 25 ml želatiini substraati igasse kahte 100 ml keeduklaasi, mis sisaldavad segamisvardaid, ja asetage need 5 minutiks 45-kraadisesse veevanni, üks katselahuse ja teine ​​tühja lahuse jaoks.

b. Testlahendus:

1) Lisage 1,0 mlBromelaini ensüümi pulberlahus katselahuse jaoks ettenähtud keeduklaasi, käivitage ajastus ja keerake.

2) Pärast täpselt 20-minutilist inkubeerimist 45 kraadi juures lisage 0,1 ml 3% vesinikperoksiidi ja segage.

3) Inkubeerige veel 5 minutit.

4) Eemaldage keeduklaas veevannilt ja sisestage pidevalt segades pH-sond.

5) Registreerige pH 10 sekundi pärast (esialgne pH)

6) Reguleerige pH 6,0-ni 0,1 N NaOH-ga. (umbes 2-4 ml)

*Märkus: pH reguleerimisel 6,0-le olge pH 5,8 juures ettevaatlik; pH tõuseb aeglaselt ja NaOH vähesed lisamised sellel hetkel tõstavad pH-d oluliselt.

7) Pidevalt segades lisage 10 ml 37% formaldehüüdi pH 9,0.

8) Registreerige pH 10 sekundi ja 1 minuti pärast.

9) Tiitrige 0,1 N NaOH-ga pH väärtuseni 9,0.

10) Registreerige tiitrimismaht. See on testi tiiter, T.

c. Tühi lahendus:

Blank Solution tuleks käivitada samaaegselt testlahendusega. Selleks alustatakse tühja lahuse määramist 12 minutit pärast testlahuse käivitamist. See annab teile aega enne tühja lahusega jätkamist testlahuse analüüsi lõpuleviimiseks.

1) Lisage pimelahuse jaoks ettenähtud keeduklaasi 0,1 ml 3% vesinikperoksiidi ja segage.

2) Pärast täpselt 20-minutilist inkubeerimist 45 kraadi juures lisage 1,0 mlbromelaiini ensüümi pulberlahus ja keeris.

3) Inkubeerige veel 5 minutit.